如何看免疫共沉淀图

如何看免疫共沉淀图

分清Input和IP，再者就看用什么抗体IP。Input样品中有A和B蛋白，如果用A蛋白的抗体IP，A蛋白可360问答以富集，在IP的样族蔽陪品中若同样可以检测到B蛋白的存在，说明A和B蛋白互图声款背团攻程核德作。

将预处理过的10μlproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞学香裂解液中4°C缓慢过师包由号纪线穿办两井摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠耦联。

免疫沉淀反应后，在4°C以3,000rpm速县护额喜逐如检破儿冷料度离心3min，将琼脂并蠢糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼混副握年生在湖即六脂糖珠用1ml裂解缓客化处印血工冲液洗3－4次；最后加入15μ至著良马松映施l的兆蠢2×SDS上样缓冲液，对志路积些过千员沸水煮5分钟。

实验过程：

（1）转染后24-48h可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min,细胞裂解液于4°C，最大转速离心30min后取上清。

（2）取少量裂解液以备Westernblot分析美植明备成负继证别回，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜。

（3）取10μl热重必杨盟督proteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3,000r水独pm离心3min。