医学翻译

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免疫组织化学和激光共聚焦显微镜扫描

冰冻组织cryosections(10米厚)被放置在gelatin-coated幻灯片和孵化15 min.中和与甘氨酸和0.1%的羧基化咪唑镇静剂100牛血清白蛋白(Aurion成功,荷兰)在PBS,pH值7.4。然后cryosections一夜之间被孵化与原抗体攻击vimentin(克隆客V9;西格码、圣路易斯、钼、美国)在一个潮湿的室。在PBS灰后,随即与缺氧antimouse IgG孵化驴,紧随其后的是streptavidin-Cy-2(Biotrend,

科隆,德国)。细胞核沾满0.002% 7-aminoactinomycin D(分子探针,巴斯、钙、美国)。省略的主要抗体阴性对照担任。

immunolabelled检查的部分用莱卡TCN-NT激光显微镜,配备氩、氦氖/ /氪激光。采取了一系列共焦段通过组织样本的深度0.5 -m间隔。为了改善图像质量,以获得一个高信噪比每一图像信号从系列是平均值。在数据采集、图像转移到一个硅图形印或辛烷值工作站(硅、钙、图形,桑尼维尔美国使用的图像恢复与重建Imaris、多渠道的图像处理软件(Bitplane,苏黎世瑞士)。方法的基本原理和无数的图像btained用这种技术已经以前发表的[第四十六条、第四十七条]。在double-labelling实验,cryosections一夜之间被孵化与原多克隆抗体对c-kit(Dako,Glostrup、丹麦),其次为驴anti-rabbit IgG加上Cy2(Dianova、汉堡、德国)。在经过反复冲洗PBS,准备工作…antivimentin抗体直接与Cy3加上。Myofibrils是为微染,633 -共轭phalloidin灼。细胞核沾满4、6-diamidino-2-phenylindole(金)(分子探针)。所有准备被安装在Mowiol(Hoechst、法兰克福、德国)。经典的免疫细胞化学方法对其进行了fomalin-fixed,paraffin-embedded组织部门avidin-biotin过氧化物酶的复合形法,如前所报道。主要的抗体为:CD34 -单克隆,(2):100 -,克隆QBEND 10(Biogenex,圣罗曼、钙、美国)和vimentin,单克隆,(2):100 -,克隆V-9(Biogenex)。